CCK8實驗

簡要描述：CCK8實驗，全稱Cell Counting Kit-8，是一種常用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測的比色法。該實驗基于WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽）的還原反應(yīng)。在電子耦合試劑1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓liusuan二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下，WST-8被活細(xì)胞中線粒體中的脫氫酶還原形成橙黃色的甲瓚產(chǎn)物（F

更新時間：2024-10-11
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CCK8實驗，全稱Cell Counting Kit-8，是一種常用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測的比色法。該實驗基于WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽）的還原反應(yīng)。在電子耦合試劑1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓liusuan二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下，WST-8被活細(xì)胞中線粒體中的脫氫酶還原形成橙黃色的甲瓚產(chǎn)物（Formazan dye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，通過測定在特定波長（通常是450nm）處的吸光度（OD值），可以間接計算活細(xì)胞的數(shù)量。

CCK8實驗步驟

1.細(xì)胞接種：將細(xì)胞接種到96孔板中，并在適宜條件下培養(yǎng)至適宜密度。

2.藥物處理：向含有細(xì)胞的孔中加入不同濃度的待測物質(zhì)。

3.孵育：將培養(yǎng)板在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間，以便藥物與細(xì)胞作用。

4.添加CCK8：向每個孔中加入CCK8溶液，繼續(xù)孵育一段時間（通常為1-4小時）。

5.檢測吸光度：使用酶標(biāo)儀在450nm波長處測定各孔的吸光度值。

6.數(shù)據(jù)分析：根據(jù)吸光度值計算細(xì)胞的相對生存分?jǐn)?shù)或抑制率，并進(jìn)行進(jìn)一步分析。

注意事項

1.實驗中應(yīng)避免使用含有強(qiáng)還原劑的培養(yǎng)基，以免影響CCK8的檢測結(jié)果。

2.實驗前應(yīng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線以校準(zhǔn)細(xì)胞數(shù)量與吸光度值之間的關(guān)系。

3.孵育時間應(yīng)根據(jù)實驗具體情況調(diào)整，以確保OD值處于適宜范圍內(nèi)。

4.實驗操作應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，以保證結(jié)果的重復(fù)性和可比性。

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